Вестернблоты - Иммуноблоты                         

 

Вестернблот Herpes Simplex Virus II

 

Вестернблот для определения IgG и IgM антител против различных антигенов вируса простого герпеса II типа

Краткое изложение и объяснение теста

Группа герпетических вирусов включает в себя большое количество ДНК вирусов, встречающихся в различных разновидностях. 6 из них встречаются у человека. 2 из этих 6 вирусов, вирус простого герпеса I типа (herpes simplex virus type 1 – HSV-1) и вирус простого герпеса II типа (herpes simplex virus type 2 – HSV-2), очень похожи между собой. Они имею до 50 %  гомологии в своем геноме, а вирионы имеют много похожих антигенных детерминант.

Оба вируса могут вызывать инфекцию в следующих областях:

bullet

ано-генитальной

bullet

оральной

bullet

лицевой

bullet

фарингеальной

Вирус простого герпеса I типа чаще встречается в трех последних областях, а вирус простого герпеса II типа чаще вызывает поражение ано-генитальной области.

Первичное инфицирование вирусом простого герпеса II типа происходит обычно половым путем.  Инкубационный период первичного генитального герпеса составляет 3 – 7 дней. Первыми признаками заболевания обычно являются зуд, покраснение и болевой синдром в области гениталий, после которых на различных участках гениталий появляются пузырьки. Появление пузырьков обычно сопровождается сильной болью, отеком, выделениями из уретры (влагалища), дизурическими явлениями, уретритом,  циститом или цервицитом. Паховые лимфатические узлы могут быть опухшими, при этом довольно часто отмечаются такие общие симптомы, как слабость, лихорадка, головная боль, мышечные боли и дизурические явления. Примерно через 2 дня от начала заболевания пузырьки лопаются и на их месте появляются язвочки, заживающие с образованием корки. Заживление происходит через 10 -21 день.

Несмотря на то, что в основном генитальная герпетическая инфекция вызывается вирусом герпеса II типа, около 20 %  приходится на долю вируса герпеса I типа. Тяжесть и продолжительность первичной герпетической генитальной инфекции вызванной вирусом простого герпеса I  или II типов не отличаются между собой. Однако частота рецидива генитального герпеса при инфицировании вирусом простого герпеса I типа значительно ниже, чем при инфицировании вирусом простого герпеса II типа. Более того, симптомы реактивации генитальной герпетической инфекции при инфицировании вирусом простого герпеса I типа обычно слабо выражены. Поэтому лечение генитальной герпетической инфекции при инфицировании вирусом простого герпеса I типа не имеет смысла.

Рецидивы генитального герпеса при инфицировании вирусом простого герпеса II типа  происходят в  среднем 4 раза за первые 12 месяцев после первичного инфицирования, сопровождаясь выраженными клиническими проявлениями, однако, менее выраженными, чем при первичном инфицировании. Поэтому при инфицировании вирусом простого герпеса II типа необходимости применения противовирусных препаратов, таких как ацикловир (зовиракс). Таким образом, дифференциация I и II типа вируса простого герпеса является важным моментом в выборе адекватной терапии.

Имеется также высокий риск инфицирования новорожденных во время родов, когда плод проходит через инфицированные родовые пути. У 86 % всех новорожденных с герпетической инфекцией был обнаружен вирус простого герпеса II типа. Постнатальный (послеродовой) герпес в основном вызывается инфицированием вирусом простого герпеса I типа и имеет значительно лучший прогноз. Герпес новорожденных может быть разделен на три категории в соответствии с тяжестью течения:

bullet

Локальный герпес кожных покровов, глаз и ротовой полости

bullet

Диссеминированная инфекция

bullet

Поражение центральной нервной системы - герпетический энцефалит

Локальный герпес имеет наилучший прогноз. Течение болезни редко заканчивается летальным исходом, однако без проведения специфической антивирусной терапии у 75 % новорожденных локальная инфекция прогрессирует в диссеминированную инфекцию. Смертность при диссеминированной инфекции составляет до 80 %, при поражении центральной нервной системы – герпетическом энцефалите – до 50 %. У выживших новорожденных часто отмечаются различные перманентные повреждения центральной нервной системы, такие как задержка психомоторного развития, микроцефалия, гидроцефалия, спастический синдром, слепота или трудности обучения. В связи с высокой смертностью и тяжелыми осложнениями герпеса новорожденных, врач должен быть особенно бдительным в выявлении женщин с риском наличия герпетической инфекции. Все беременные женщины с выявленными антителами против вируса простого герпеса II типа  должны особенно тщательно обследоваться на предмет выявления симптомов активной инфекции перед родами.

 Литература

  1. Corey, L., Spear, P. G. Infections with herpes simplex virus. N Engl J Med 314, 749 – 754 (1986)
  2. Greenberg, M. S., Friedmann, H., Cohen, S. G. et. al. A comparative study of herpes simplex infections in renal transplant and leukemic patients. J Infect Dis 156, 280 – 287 (1987)
  3. Scully, C. Orofacial herpes simplex infections: currents concepts in the epidemiology,  pathogenesis, and treatment, and disorders in which the virus may be implicated. Oral Surg Oral Med Oral Pathol 68, 701 – 710 (1989)
  4. Vestergaard, B. F. Laboratory diagnosis of herpes viruses. Scand J Infect Dis Suppl. 47, 22 – 32 (1985)
  5. Ashley, R., Benedetti, J., Corey, L. Humoral immune response to HSV 1 and HSV 2 viral proteins in patients with primary genital herpes. J Med Virol 17, 153 – 166( 1985)
  6. Roizman, B., Norrild, B., Chan, C., Pereira, L. Identification and preliminary  mapping with monoclonal antibodies of a herpes simplex virus 2 glycoprotein lacking a know type 2 counterpart. Virology 133, 242 – 247 (1984)
  7. Olofssen, S., Lundstrom, M., Marsden, H., Jeansson, S., Vahlne, A. Characterization of a herpes simplex type 2-specified glycoprotein with affinity for N- acetygalactosaminespecific lectines and its identification as g92K or gG. J Gen Virol 7, 737 – 744 (1986)
  8. Rabenau H., Eibner J., Weber B., Bahrdt B., Doerr H.W. Detection of Herpes simplex Virus (HSV) type specific antibodies by a microtechnique westernblot assay. Lab. med. 16, 327 – 331 (1992)
  9. Ho, D. W. T., Field, P. R., Irving, W. L., Packham, D. R., Cunningham A. L. Detection of immunoglobulin M antibodies to glycoprotein G-2 by westernblot    (Immunoblot) for diagnosis of initial Herpes simplex Virus type 2 genital infections. J. Clin. Microbiol., Dec. 1993, 3157 – 3164

Becтернблот для определения IgG и IgM антител против различных антигенов вируса простого герпеса II типа

Анализ получаемых на тестовой мембране полосок и интерпретация результатов

Пороговый уровень - Стандарт: IgM - 10 %, IgG - 20 %

С помощью данного вестернблота возможно дифференцировать следующие антигены  вируса простого герпеса I типа:

bullet

92 kDa Glycoprotein G 2 (gpG2)

Этот белок (gpG2) является единственным высокоспецифичным маркером инфицирования вирусом простого герпеса II типа. Титр антител растет через 7 – 14 дней от начала инфекции. Перекрестная реакция с антигенами других вирусов не установлена. Таким образом, выявление антител против антигена 92 kDa (gpG2) является доказательством контакта или недавно перенесенной инфекции (при наличии антител IgM класса) вирусом простого герпеса II типа.

bullet

40 и 65 kDa

Антитела против данных антигенов являются ранним маркером инфицирования вирусом простого герпеса. Они не специфичны для вируса простого герпеса II типа и имеют перекрестную реакцию к вирусу простого герпеса I типа. Таким образом, выявление данных антител подтверждает положительные IgM результаты, однако не может дифференцировать вирус простого герпеса I типа и II типа. Данные антитела являются первым иммунным ответом организма на герпетическую инфекцию (как вирусом простого герпеса II типа так и I типа).

Критерии интерпретации теста

Истинно положительный результат теста на выявление инфицирования вирусом простого герпеса II типа считается при выявлении на мембране вестернблота специфической gpG2 полоски (92 kD). Данные антитела появляются через 7 – 10 дней после начала инфекции. Если данные антитела не определяются, необходимо повторить тест через 7 – 10 дней.

Наличие IgM-антител против антигенов 40 kDa и 65 kDa является самым ранним ответом после начала инфекции. Они могут выявляться уже через 3 – 7 дней после первичного инфицирования. Соответствующие IgG антитела растут через 7 – 10 дней.  К сожалению, выявление данных антител не позволяет дифференцировать между вирусами простого герпеса I и II типа. Образование IgM и IgA антител к вирусу простого герпеса 1 типа происходит значительно слабее, чем  образование IgG антител, поэтому наличие даже слабо выраженных полосок на блоте должно приниматься во внимание.

Ограниченности метода

Результаты теста должны трактоваться в контексте общей клинической картины и других лабораторных данных.

Корреляция между типом появляющихся поперечных полосок на мембране вестернблота, интенсивности их окраски и тяжестью заболевания на сегодня не доказана.

Отрицательный результат теста не исключает возможности недавно перенесенной инфекции. Если у больного имеются клинические признаки заболевания, рекомендуется проведение теста на выявление IgM-антител. Если оба теста отрицательные, рекомендуется повторить тест через 6 – 8 дней для исключения замедленного иммунного ответа с выработкой антител.

 

Обратная связь

E-mail: postmaster@westernblot.ru

Вы можете сделать данные тесты www.fides-lab.ru

Тел: 8 (495) 401 05 77

Москва, Алтуфьевское шоссе 9 (Метро Владыкино)