Вестернблоты - Иммуноблоты                         

 

принцип теста иммуноблота (Вестернблота)

(На примере Helicobacter Pylori Westernblot)

Helicobacter Pylori Westernblot – это иммуноблот для определения IgG- или IgA-антител против Helicobacter Pylori.

Антигены H. Pylori разделяются методом электрофореза (SDS-PAGE - sodium dodecyl sulphate polyacrilamid gel electrophoresis). В соответствии с их молекулярным весом, антигены мигрируют по гелю как тонкие полоски. После разделения антигенов методом электрофореза, они (антигены в виде полосок)  переносятся на нитроцеллюлозную мембрану.

После помещения мембраны в соответствующую ячейку инкубатора, свободные неспецифические связывающие места блокируются белками блокирующего буфера во время первой инкубации.

После удаления блокирующего буфера, мембрана инкубируется с предварительно разведенной пробой сыворотки крови. Если в пробе сыворотки крови присутствуют антитела против H. Pylori, они будут связываться во время второй инкубации со своими соответствующими антигенами, нанесенными на мембране.

Несвязавшиеся компоненты сыворотки крови вымываются промывающим буфером.

Специфически связанные IgG и IgA метятся во время третьей инкубации высоко специфичными анти-человеческими IgG-(IgA)-антителами, меченными щелочной фосфатазой.

После второй промывки, специфически связанный фермент определяется по его реакции с субстратом (BCIP).

Меченный антиген будет виден на мембране как голубая окрашенная поперечная полоска. Используя шаблоны, специфичные для данного набора, по месторасположению проявившихся голубых окрашенных поперечных полосок на мембране, можно идентифицировать антитела, присутствующие в сыворотке крови, и, соответственно, вид антигенов данного штамма Helicobacter Pylori. 

 

Обратная связь

E-mail: postmaster@westernblot.ru

Вы можете сделать данные тесты www.fides-lab.ru

Тел: 8 (495) 401 05 77

Москва, Алтуфьевское шоссе 9 (Метро Владыкино)