Вестернблоты - Иммуноблоты                         

 

Вестернблот Yersinia Enterocolitica

 

Вестернблот для определения IgG и IgA антител против различных антигенов Yersinia Enterocolitica

Краткое изложение и объяснение теста

Yersiniae является членом рода Enterobacteriaceae.

Выделяют три вида, патогенных для человека:

bullet

Yersinia Pestis

bullet

Yersinia Pseudotuberculosis

bullet

Yersinia Enterocolitica

На основании О-антигена выделяется 34 серотипа Yersinia. Только серотипы, содержащие плазмиды, могут инфицировать человека (в России - 0:9, 0:3, 0:16,  0:5, 27). Касательно путей  передачи заболевания имеются определенные объяснения, однако доказательства отсутствуют.

В большинстве случаев инфицирование Yersinia enterocolitica вызывает мезентериальный лимфаденит с клинической картиной энтерита, псевдоаппендицита, илеита или колита. Тяжесть проявления заболевания зависит от возраста пациента. Экстрамезентериальные формы (20 – 25 % всех случаев), локализованные инфекции после диссеминации, септические формы и лимфаденопатический синдром могут иметь место, как на фоне предшествующего энтерита, так и без него. Сохранение Yersinia enterocolitica в лимфатических узлах и в связанной с кишечником лимфатической ткани, возможно, является причиной хронических и рецидивирующих форм заболевания.

Наиболее частыми вторичными иммунопатологическими проявлениями, вызванными Yersinia, являются реактивный артрит и узловая эритема.

Yersinia-индуцированный реактивный артрит обычно начинается через 1 – 4 недели после начала кишечных симптомов. Однако, важно отметить, что большое количество пациентов не могут сообщить о наличии в анамнезе каких-либо кишечных симптомов до проявления артрита. В большинстве случаев поражаются суставы нижних конечностей. Реактивный артрит обычно продолжается 3 – 12 месяцев, а затем идет на убыль, однако у ряда пациентов заболевание приобретает хронический и рецидивирующий характер, при этом данный реактивный артрит невозможно отличить от других форм спондилоартрита. 60 – 80 % этих пациентов являются положительными по наличию HLA-B27. В большинстве случаев Yersinia-индуцированных артритов в сыворотке крови или синовиальной жидкости определяется наличие персистирующих Yersinia-специфических IgA антител или иммунных комплексов с дальнейшей Yersina-специфической пролиферацией синовиальных лимфоцитов. Персистирование IgA антител обычно сочетается с персистированием патогенных (плазмид-содержащих) штаммов Yersiniae в лимфатической ткани кишечника.

В ряде случаев инфекция Yersina проявляется узловатой эритемой, которая более часто встречается у взрослых женщин и также может сопровождаться реактивным артритом. Кожные симптомы обычно появляются через 4 - 6 после начала инфекции.

Старые серологические методы определения антител к Yersinia основывались на тестах агглютинации. Однако в большинстве при начале артритических симптомов уровень этих агглютининов был ниже определяемого уровня. В то же время пробы кала уже были отрицательными.  Поэтому, в большинстве случаев инфекция Yersinia не диагностировалась. Дополнительная проблема таких старых методов, как реакция Видаля, была перекрестная реактивность с другими грамм-отрицательными бактериями.

Только техника иммуноблотинга с использованием специфических вирулентно-ассоциированных антигенов и определение класса-специфичных антител может помочь ответить на вопрос, где имеется давняя персистирующая инфекция, а где ранняя свежая инфекция Yersinia enterocolitica. Ответ на этот вопрос является очень важным для определения прогноза заболевания и принятия решения о выборе адекватной терапии.

Анализ получаемых на тестовой мембране полосок и интерпретация результатов

Пороговый уровень - Стандарт: IgA - 10 %, IgG - 15 %

Для изготовления данного иммуноблота используется супернатант кальций-дефицитной культуры бактерий Yersinia серовар 0:9. При этих условиях патогенный штамм Yersinia теряет так называемый Yersinia outer proteins (yop) – внешний белок Yersinia или  „release proteins“ (RP) – освобождающий протеин. Эти белки закодированы в плазмиде, они высоко патогенны и высоко специфичны для патогенной человеческой Yersinia. Иммунный ответ в виде образования антител может наблюдаться против следующих белков:

bullet

Yop 1 (58 kD)

Об это белке практически ничего не известно. Возможно, он вовлечен в активный захват железа бактерией из окружающей среды. Иммунный ответ - IgG антитела.

bullet

Yop 2a (48 kD)

Этот белок отвечает за способность Yersiniae ингибировать агрегацию тромбоцитов. Иммунный ответ - IgG антитела.

bullet

Yop 2b (46 kD)

Это белок дает возможность Yersiniae быть резистентной к фагоцитозу. Иммунный ответ - IgG антитела.

bullet

Yop 3 (40 kD) или V-Antigen

Роль этого белка изучена мало. Иммунный ответ - IgG или IgA антитела.

bullet

Yop 4a (36 kD)

Функция белка дискутабельна. Основное количество IgA антител образуется именно против этого белка, поэтому результаты особенно важны.

bullet

Yop 4b (34kD)

Функция этого белка недостаточно ясна. Иммунный ответ - IgA или IgG антитела, однако проявляется очень редко.

bullet

Yop 5 (25 kD)

Этот белок играет важную роль в цитотоксичности Yersiniae. Иммунный ответ – в основном, IgG антитела.

bullet

sp - Protein“ (80 kD)

Этот белок не закодирован в плазмиде, однако является специфичным для Yersinia.

 Интерпретация

IgG

bullet

Результаты данного теста оцениваются как положительные при наличии как минимум 4 из выше перечисленных YOP полосок.

bullet

Результаты данного теста оцениваются как пограничные при наличии как минимум 3 из выше перечисленных YOP полосок.

IgA

bullet

Результаты данного теста оцениваются как положительные при наличии как минимум 2 из выше перечисленных YOP полосок.

 

Обратная связь

E-mail: postmaster@westernblot.ru

Вы можете сделать данные тесты www.fides-lab.ru

Тел: 8 (495) 401 05 77

Москва, Алтуфьевское шоссе 9 (Метро Владыкино)